Определения

Подтвержденный случай холеры  

  • Любой случай инфицирования бактерией Vibrio cholerae серогруппы O1 или O139, подтвержденный по результатам культурального исследования (в том числе сероагглютинации) или тестирования по методу ПЦР, считается подтвержденным случаем холеры. 
  • Если другими подразделениями эпиднадзора не зарегистрировано подтвержденной вспышки холеры и не зафиксировано эпидемиологической связи с подтвержденным случаем холеры или источником заражения в другой стране, требуется также подтверждение токсигенности штамма бактерий (по методу ПЦР). 

Подтвержденная вспышка холеры 

  • Подтвержденная вспышка холеры выявляется, когда подразделением эпиднадзора зарегистрирован, по крайней мере, один подтвержденный случай холеры местного происхождения. 

Лабораторное подтверждение

  • Объявляйте вспышку заболевания, вызываемого бактерией Vibrio cholerae серогруппы O1 или O139, в случае подтверждения по результатам культурального исследования или тестирования по методу ПЦР и наличии данных о местном происхождении инфекции (завозные случаи исключаются). 
  • Если другими подразделениями эпиднадзора не зарегистрировано подтвержденной вспышки холеры и не зафиксировано эпидемиологической связи с подтвержденным случаем холеры или источником заражения в другой стране, требуется также подтверждение токсигенности штамма бактерий (по методу ПЦР). 
  • Для определения противомикробного лечения проведите тестирование чувствительности к противомикробным препаратам, как минимум, на первых подтвержденных изолятах (т.е. первом подтвержденном случае). 
  • Кроме того, рекомендуется проведение секвенирования полного генома в подтвержденных случаях холеры неизвестного происхождения (т.е. завозных случаях). Однако это не является обязательным требованием для осуществления вмешательства органами общественного здравоохранения.  

Сбор, кондиционирование, хранение и транспортировка образцов для подтверждения методом культурального исследования или ПЦРтеста

  • Точность и надежность результатов тестирования зависит от правильности сбора, упаковки, транспортировки и хранения образцов. 
  • Тестирование на холеру проводится с использованием образцов стула пациентов. 
  • Собирайте образцы фекалий (стула или ректальных мазков) в случаях подозрения в течение первых 4 суток с начала заболевания (когда патогены обычно присутствуют в наибольшей концентрации) и, по возможности, до начала любой противомикробной терапии.  
  • Однако, если противомикробная терапия была начата до взятия образца, информация о назначенном антибиотике, дозировке и продолжительности приема должна быть четко указана в форме запроса на лабораторное исследование. Антибиотикотерапия может отрицательно повлиять на результаты лабораторного исследования. 
  • Не откладывайте регидратацию пациентов до взятия образцов. Допускается сбор образцов после начала регидратации. 

Сбор образцов  

  • Самостоятельные пациенты. Предоставьте пациенту емкость, например ведро/судно без остатков моющего или дезинфекционного средства, либо новый пластиковый пакет (например, пакет с замком-молнией), а в идеале широкий биоразлагаемый бумажный стаканчик с достаточно широким горлом. Объясните пациенту, что необходимо: 1) перед использованием емкости помочиться; и 2) произвести дефекацию в емкость. Собранный неоформленный стул можно перенести в контейнер для образцов стула или нанести на тампон. 
  • Лежачие пациенты. Используйте чистое неиспользованное судно или ведро. Перед повторным использованием судно или ведро необходимо вымыть, обработать хлором, тщательно промыть и высушить. На судне или ведре не должно быть остатков хлора или иного дезинфекционного средства. Поместите судно или ведро под отверстием холерной кровати для или под пациентом. Соберите свежевыделенный стул. Собранный неоформленный стул можно перенести в контейнер для образцов стула или нанести на тампон. 
  • Ректальный мазок. В редких случаях может потребоваться ректальный мазок. Попросите пациента лечь на бок и поднять верхнюю ногу, согнув в колене. Смочите тампон в стерильной транспортной среде или физрастворе. Введите тампон вглубь сфинктера прямой кишки на 3–4 см. Поворачивайте тампон в течение 5–10 секунд, а затем аккуратно извлеките. Осмотрите тампон на наличие видимого фекального материала. 

Кондиционирование образцов для транспортировки  

  • Известны пять общепринятых методов кондиционирования образцов холеры для транспортировки в лабораторию. 
  • Выбор метода кондиционирования зависит от того, какие средства доступны (стаканчики для стула, тампоны Кэри-Блэра и т.д.), в какой срок предполагается исследовать образцы (в течение 2 часов, > 2 часов, позднее) и какой тип теста будет проводиться в лаборатории (БДТ, культуральное исследования, ПЦР-тест и т.д.). Метод выбирается по согласованию с лабораторией. 
  • Все образцы следует хранить и перевозить при температуре окружающей среды (22–25°C), защитив от попадания прямых солнечных лучей. 
  • Свежие образцы в стаканчиках для стула:  
    • если возможна доставка образца в лабораторию в течение двух часов, допускается отправка образца непосредственно в стаканчике для стула.  
  • Тампоны Кэри-Блэра:  
    • если доставка образца в лабораторию может занять до сем суток, образец необходимо хранить в среде Кэри-Блэра. Транспортная среда Кэри-Блэра имеет срок годности до одного года с даты выпуска и не требует охлаждения (ни перед использованием, ни после инокуляции). Среду можно использовать, если она не выглядит высохшей, загрязненной или обесцвеченной;  
    • погрузите тампон с кончиком из хлопка или полиэстера в свежевыделенный стул и сразу поместить в транспортную среду Кэри-Блэра, протолкнув ко дну пробирки. Если проводился ректальный мазок, сразу поместите тампон в пробирку с транспортной средой Кэри-Блэра, протолкнув его ко дну пробирки;  
    • верхнюю часть палочки, выступающую за края пробирки, отломите и выбросите. 
  • Образцы в щелочной пептонной воде (ЩПВ):  
    • щелочная пептонная вода (ЩПВ) не является транспортной средой, но способствует росту бактерий Vibrio cholerae. Данный метод пригоден только в том случае, если образец может быть доставлен в лабораторию в течение 24 часов;  
    • пробирки со стерильной ЩПВ заранее готовятся в лаборатории. Перенесите свежевыделенный стул из первоначальной емкости в пробирку с ЩПВ в пропорции не более 10% фекального материала от общего объема ЩПВ.  
  • Образцы на влажной фильтровальной бумаге:  
    • если транспортная среда Кэри-Блэра отсутствует, а образец невозможно доставить в лабораторию в течение двух часов, для культурального исследования можно использовать образец жидкого стула на фильтровальной бумаге во влажной среде (т.е. влажной фильтровальной бумаге). Тесты с образцами, подготовленными таким способом, можно проводить в течение 15 суток;  
    • пользуясь пинцетом, окуните небольшой диск фильтровальной бумаги в образец свежевыделенного стула, не контактировавший с хлором или дезинфекционным средством. Поместите образец в микропробирку с завинчивающейся крышкой и добавьте несколько капель обычного физраствора, чтобы образец не пересыхал. Закройте и храните пробирку при комнатной температуре. 
  • Образцы на сухой фильтровальной бумаге: 
    • сухую фильтровальную бумагу допускается использовать для транспортировки образцов фекалий только для выявления специфического участка ДНК методом ПЦР. Данные образцы могут храниться в течение длительного времени; 
    • капните небольшое количество жидких фекалий на сухую фильтровальную бумагу и дайте высохнуть. После высыхания поместите фильтровальную бумагу, пользуясь пинцетом, в микропробирку с завинчивающейся крышкой или отдельный пакет и храните при комнатной температуре. Не добавляйте физраствор. 
  •  Все образцы отправляются в лабораторию на имя координатора по вопросам холеры с приложением запроса на проведение лабораторного исследования, в котором указывается, как минимум, следующая информация: название медицинского учреждения, отделения или центра по лечению холеры (ОЛХ/ЦЛХ) или больницы, фамилия или инициалы пациента, возраст, место жительства, дата и время взятия образца, симптомы (или план лечения), результат БДТ (если проводился) и вид запрашиваемого исследования (культуральное исследование и/или ПЦР-тест на холеру). 
  • Для всех образцов:  
    • всегда храните образцы при температуре окружающей среды. Не охлаждайте образцы, так как охлаждение может существенно снизить популяцию бактерий Vibrio cholerae; 
    • не допускайте пересыхания образцов (кроме образцов, отправляемых на сухой фильтровальной бумаге для проведения ПЦР-теста). При необходимости добавьте несколько капель обычного физраствора;  
    • перевозите образцы в надлежащим образом промаркированном герметичном контейнере при температуре окружающей среды;  
    • проверьте, чтобы все образцы и контейнеры были надлежащим образом промаркированы и к ним прилагался формуляр запроса/направления на проведение исследования;  
    • отправкой необходимо убедитесь в том, что принимающая лаборатория обладает квалифицированным персоналом и возможностями для работы с соответствующими видами образцов (например, для проведения культурного исследования образцов на влажной фильтровальной бумаге или ПЦР-теста образцов на сухой фильтровальной бумаге). 

Транспортировка образцов  

  • Для транспортировки образцов, собранных при в случаях подозрения на холеру, требуется тройная упаковка. 
  • Обеспечьте строгое соблюдение национальных и/или международных нормативных актов и проведите соответствующий инструктаж для работников транспортных служб. 
  • Обеспечьте наличие легко доступных стандартных процедур транспортировки образцов холеры, учитывающих местные условия (вид транспорта, продолжительность перевозки). 
  • Образцы должны перевозиться вместе с формулярами запроса/направления на проведение исследований. 
  • Для обеспечения высокого качества образцов стула, направляемых для тестирования на холеру, они должны храниться при температуре от 22°C до 25°C. Если не ожидается повышение температуры до более чем 35°C, холодовые элементы не требуются. Если необходимо использование холодовых элементов, их следует размещать между второй и третьей упаковками, не допуская прямого контакта с образцами стула.  

Сообщение результатов лабораторных исследований

  • Лаборатории должны иметь регулярно обновляемые базы данных по всем полученным и исследованным образцам с указанием результатов исследований.  
  • Обеспечьте наличие национальных стандартных процедур и форм лабораторной отчетности и механизмов контроля качества для обеспечения соблюдения минимальных требований к полноте и точности отчетности.  
  • По завершении исследования лаборатория должна немедленно отправить результаты в: 
    • медицинское учреждение, в которое поступил пациент, с указанием идентификационных данных при наличии таковых для внесения результатов в реестр и медицинскую карту; и 
    • орган здравоохранения для актуализации эпидемиологической информации.  
  • Незамедлительно передавайте результаты тестирования на чувствительность к противомикробным препаратам в клиническую службу министерства здравоохранения и медицинское учреждение для обеспечения надлежащего противомикробного лечения. 

Дополнительные материалы 

  1. Public Health Surveillance for Cholera – Guidance Document 2024. Global Task Force on Cholera Control. April 2024. https://www.gtfcc.org/wp-content/uploads/2024/04/public-health-surveillance-for-cholera-guidance-document-2024.pdf 

  2. Global Taskforce on Cholera Control. Job Aid: Rapid Diagnostic Test (RDT) for cholera detection. Revised 2024. https://www.gtfcc.org/wp-content/uploads/2022/01/gtfcc-job-aid-rapid-diagnostic-test-for-cholera-detection-en-1.pdf

  3. Global Taskforce on Cholera Control. Information on specimen collection, preparation and packaging for transport. https://www.gtfcc.org/resources/specimen-collection-preparation-and-packaging-for-transport/

  4. Global Taskforce on Cholera Control. Example laboratory request/referral and results reporting forms. https://www.gtfcc.org/resources/gtfcc-laboratory-referral-and-results-reporting-forms/

  5. Global Taskforce on Cholera Control. Guidance on culture methods for testing for Vibrio cholerae. https://www.gtfcc.org/resources/isolation-and-presumptive-identification-of-vibrio-cholerae-o1-o139-from-fecal-specimens-2/

  6. Global Taskforce on Cholera Control. Guidance for antimicrobial susceptibility testing. https://www.gtfcc.org/resources/antimicrobial-susceptibility-testing-for-treatment-and-control-of-cholera-2/

  7. World Health Organization – Regional Office for Africa. Technical guidelines for integrated disease surveillance and response in the WHO African Region – Booklet four. 3rd ed. 2019.https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/312364/WHO-AF-WHE-CPI-02.2019-eng.pdf

Share icon